apoC-III Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403887-ACT

L’APOC3 umano codifica l’apolipoproteina C-III (apoC-III), un’apolipoproteina secreta che modula il metabolismo delle lipoproteine ricche di trigliceridi limitando l’idrolisi mediata dalla lipoproteina lipasi e ritardando la clearance epatica delle particelle residue (remnants). Attraverso i suoi effetti sul traffico delle VLDL e dei remnants dei chilomicroni, apoC-III influenza le vie di trasporto dei lipidi e l’omeostasi energetica sistemica. Un’espressione alterata di APOC3 è associata a fenotipi di dislipidemia caratterizzati da trigliceridi plasmatici elevati e da cambiamenti nei profili delle lipoproteine aterogene, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per lo studio della biologia del rischio cardiometabolico. Nei modelli cellulari, la regolazione di APOC3 può essere esaminata insieme al controllo trascrizionale dei programmi epatici di gestione dei lipidi e alla processazione delle apolipoproteine lungo la via secretoria.

apoC-III Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di APOC3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

apoC-III Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus APOC3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione APOC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di apoC-III. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus APOC3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da apoC-III nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via apoC-III nelle cellule tumorali con espressione di APOC3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.