Ape2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-407307-LAC

Human APEX2 (Ape2) codifica una nucleasi di riparazione del DNA implicata nel mantenimento della stabilità del genoma durante la replicazione del DNA e in risposta a danni ossidativi e da alchilazione. Ape2 partecipa alla riparazione per escissione di basi e all’elaborazione dei siti abasici, coordinandosi con le vie di replicazione e di checkpoint per limitare lo stress replicativo e l’accumulo di rotture dei filamenti di DNA. Un’attività alterata di APEX2 è stata associata a difetti nella segnalazione del danno, a un aumento del carico mutazionale e a ipersensibilità cellulare a agenti genotossici, collegandola alla biologia del cancro e a più ampi meccanismi di mantenimento del genoma. Come bersaglio di ricerca, APEX2 consente studi meccanicistici sulla scelta delle vie di riparazione del DNA, sull’integrità delle forcelle di replicazione e sulle reti di segnalazione indotte dallo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale Ape2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di APEX2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Ape2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione APEX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Ape2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo APEX2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.