APC8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406761

Panoramica

CDC23 codifica APC8, una subunità fondamentale del complesso promotore dell’anafase/ciclosoma (APC/C), una ligasi E3 dell’ubiquitina che coordina la progressione mitotica e l’uscita dal ciclo cellulare indirizzando alla degradazione proteasomiale regolatori chiave come la securina e le cicline. APC8 contribuisce all’assemblaggio dell’APC/C e al riconoscimento dei substrati, integrando i segnali dei checkpoint per garantire la corretta separazione dei cromatidi fratelli e il mantenimento della stabilità genomica. Attraverso il suo ruolo nella proteolisi mediata dall’ubiquitina, CDC23 è collegato a vie che regolano il controllo del checkpoint del fuso, la tempistica mitotica e le transizioni ordinate attraverso G2/M e l’anafase. La deregolazione dei componenti dell’APC/C e dei meccanismi associati di controllo del ciclo cellulare è spesso implicata in disturbi proliferativi e in fenotipi legati all’aneuploidia, rendendo CDC23/APC8 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sui difetti della divisione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO APC8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDC23 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDC23 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDC23 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina APC8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDC23 per lo studio della segnalazione di APC8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDC23 critici per la funzione di APC8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDC23 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal APC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal APC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDC23. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal APC8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR APC8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDC23 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDC23 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.