ANKRD22 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416874-ACT

ANKRD22 (proteina contenente ripetizioni di ankyrina, dominio 22) è una proteina umana con ripetizioni di ankyrina implicata in reti di interazione proteina–proteina che modellano la segnalazione cellulare e la regolazione della trascrizione. Sebbene i suoi ruoli meccanicistici restino definiti solo parzialmente, l’espressione di ANKRD22 è stata collegata a cambiamenti dipendenti dal contesto nella proliferazione cellulare, nell’adattamento metabolico e nei programmi di risposta allo stress. Studi trascrittomici riportano livelli alterati di ANKRD22 in molteplici tipi di tumore, sostenendo l’indagine del suo contributo alla segnalazione oncogenica, all’adattamento al microambiente tumorale e a fenotipi associati a biomarcatori. In quanto potenziale nodo regolatorio, ANKRD22 è di interesse per analizzare il cross-talk tra vie di segnalazione che influenza il controllo della crescita e l’omeostasi cellulare.

ANKRD22 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ANKRD22 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ANKRD22 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ANKRD22 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ANKRD22, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ANKRD22. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ANKRD22 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ANKRD22 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ANKRD22 nelle cellule tumorali con espressione di ANKRD22 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.