ANKRA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417372

Panoramica

ANKRA2 (ankyrin repeat family A member 2) codifica ANKRA, una proteina contenente ripetizioni di anchirina che si ritiene supporti reti di interazione proteina-proteina in grado di influenzare processi di regolazione genica e di segnalazione. Le proteine con ripetizioni di anchirina partecipano comunemente all’assemblaggio di complessi trascrizionali o associati alla cromatina e possono modulare la stabilità o la localizzazione dei componenti delle vie di segnalazione. Nelle cellule umane, ANKRA2 viene studiato nel contesto di programmi di omeostasi cellulare quali la differenziazione e la regolazione in risposta allo stress, in cui fattori di tipo “scaffold” contribuiscono a modulare l’output delle vie di segnalazione. Un’alterata regolazione delle proteine contenenti ripetizioni di anchirina è stata collegata in senso ampio a un controllo trascrizionale disfunzionale e a cambiamenti dello stato cellulare rilevanti per la biologia delle malattie, il che motiva studi meccanicistici sulla funzione di ANKRA2.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ANKRA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ANKRA2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ANKRA2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ANKRA2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ANKRA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ANKRA2 per lo studio della segnalazione di ANKRA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ANKRA2 critici per la funzione di ANKRA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ANKRA2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ANKRA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ANKRA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ANKRA2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ANKRA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ANKRA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ANKRA2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ANKRA2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.