Angptl2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424003-ACT

Angptl2 (angiopoietin-like 2) è una glicoproteina secreta che, nel topo, funge da regolatore dipendente dal contesto dell’omeostasi vascolare e tissutale. È stata implicata nella modulazione del comportamento delle cellule endoteliali e della muscolatura liscia, nel rimodellamento della matrice extracellulare e nella segnalazione infiammatoria, collegando segnali stromali e immunitari a cambiamenti nell’angiogenesi e nel metabolismo. L’attività di Angptl2 interseca vie che controllano la produzione di citochine, il reclutamento dei leucociti e il rimodellamento tissutale, rendendola rilevante per studi su infiammazione cronica, fibrosi, disfunzioni metaboliche e microambienti associati ai tumori. Un’alterata espressione di Angptl2 viene spesso analizzata come possibile motore di stati pro-infiammatori e del rimodellamento vascolare in modelli di malattie cardiometaboliche e infiammatorie.

Angptl2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Angptl2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Angptl2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Angptl2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Angptl2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Angptl2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Angptl2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Angptl2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Angptl2 nelle cellule tumorali con espressione di Angptl2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.