AMPKβ2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403537-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AMPKβ2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AMPKβ2 Double Nickase Plasmid (h) e il AMPKβ2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PRKAB2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AMPKβ2 Antibody (C-7): sc-376752
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AMPKβ2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403537-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AMPKβ2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403537-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKAB2 codifica la subunità regolatoria β2 della protein chinasi attivata da AMP (AMP-activated protein kinase, AMPK), un sensore energetico centrale che coordina le risposte cellulari alla disponibilità di nutrienti e allo stress energetico. AMPKβ2 contribuisce a fungere da impalcatura per la subunità catalitica α e la subunità regolatoria γ e favorisce la stabilità del complesso, la localizzazione subcellulare e la selezione dei substrati, influenzando così vie che regolano l’assorbimento di glucosio, l’ossidazione degli acidi grassi, l’autofagia e l’inibizione dei segnali anabolici attraverso mTORC1. Attraverso queste funzioni, AMPKβ2 partecipa al mantenimento dell’omeostasi metabolica nei diversi tessuti e modella programmi adattativi durante ipossia, stress mitocondriale e segnalazione di tipo “exercise-like”. La disregolazione della segnalazione di AMPK, inclusa un’attività alterata associata a PRKAB2, è stata collegata a fenotipi di malattie metaboliche ed è spesso studiata nel contesto del metabolismo delle cellule tumorali e della tolleranza allo stress.
AMPKβ2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRKAB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRKAB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRKAB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRKAB2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.