Aldose Reductase Plasmide Double Nickase (h): sc-401437-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Aldose Reductase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Aldose Reductase Double Nickase Plasmid (h) e il Aldose Reductase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AKR1B1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Aldose Reductase Antibody (H-6): sc-166918
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Aldose Reductase Plasmide Double Nickase (h) | sc-401437-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aldose Reductase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401437-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKR1B1 codifica l’aldoso reduttasi umana, un’aldo-cheto reduttasi NADPH-dipendente che catalizza la riduzione del glucosio a sorbitolo come primo passaggio della via dei polioli. Consumando NADPH e favorendo l’accumulo di sorbitolo, l’aldoso reduttasi può influenzare l’equilibrio redox cellulare, le risposte allo stress osmotico e il metabolismo a valle del fruttosio, intersecandosi con i processi di stress ossidativo e di detossificazione dei composti carbonilici. L’attività di AKR1B1 è spesso studiata nel contesto dello stress metabolico associato all’iperglicemia, della segnalazione legata all’infiammazione e della suscettibilità dei tessuti al danno ossidativo. Nei modelli sperimentali, una deregolazione del flusso nella via dei polioli e un’alterata gestione delle aldeidi sono state collegate ai meccanismi alla base delle complicanze diabetiche e di fenotipi più ampi di malattia metabolica.
Aldose Reductase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AKR1B1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AKR1B1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AKR1B1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AKR1B1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.