Plásmido CRISPR de Activación (h) AFP/Alpha fetoprotein: sc-400355-ACT

AFP codifica la alfa-fetoproteína, una importante glicoproteína secretada oncofetal producida predominantemente por el hígado fetal y el saco vitelino, y cuya expresión disminuye tras el nacimiento. AFP contribuye a los programas de desarrollo al favorecer la diferenciación de los hepatoblastos y modular señales extracelulares que influyen en la proliferación y la supervivencia. En tejidos adultos, la reexpresión aberrante de AFP se asocia con la desdiferenciación del linaje hepatocelular y con estados transcripcionales alterados observados en el cáncer hepático y trastornos hepáticos relacionados. Como proteína secretada tipo biomarcador, AFP se utiliza con frecuencia para estudiar el desarrollo del hígado, las transiciones del estado celular hepático y los fenotipos secretores asociados a tumores.

AFP/Alpha fetoprotein El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AFP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AFP/Alpha fetoprotein El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AFP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AFP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AFP/Alpha fetoprotein. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AFP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AFP/Alpha fetoprotein en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AFP/Alpha fetoprotein en células tumorales con expresión de AFP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.