ADH7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-419006-KO-2

Panoramica

Adh7 codifica l’alcol deidrogenasi 7 (ADH7), un’ossidoreduttasi NAD-dipendente che contribuisce al metabolismo dei retinoidi e di un’ampia gamma di substrati alcolici e aldeidici, influenzando così l’equilibrio redox cellulare e la capacità di detossificazione. Nei tessuti murini in cui è espressa, l’attività di ADH7 può intersecarsi con le fasi di conversione del retinolo in retinaldeide che alimentano la segnalazione dell’acido retinoico, una via fondamentale per i programmi di differenziamento e per l’omeostasi epiteliale. Alterazioni nella gestione delle aldeidi e nel metabolismo dei retinoidi sono spesso associate a risposte allo stress ossidativo e a una disregolazione del controllo della crescita, rendendo Adh7 un nodo utile per studiare il contributo metabolico al rimodellamento tissutale e a fenotipi rilevanti per la malattia. Poiché il metabolismo di alcoli/aldeidi influisce anche sulla segnalazione lipidica e infiammatoria, la perturbazione di Adh7 può essere sfruttata per indagare il crosstalk tra enzimi metabolici e programmi trascrizionali a valle delle reti regolate dai retinoidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADH7 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adh7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adh7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adh7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADH7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adh7 per lo studio della segnalazione di ADH7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adh7 critici per la funzione di ADH7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adh7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADH7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ADH7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adh7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADH7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ADH7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adh7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adh7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.