ADAM9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403665-ACT

ADAM9 codifica una metalloproteasi-disintegrina transmembrana che regola lo shedding (distacco proteolitico) dell’ectodominio delle proteine di membrana e il rimodellamento dell’ambiente pericellulare. Attraverso l’elaborazione proteolitica dei precursori dei fattori di crescita e delle molecole di adesione, ADAM9 influenza le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice, la segnalazione recettoriale e la proteostasi, interfacciandosi con vie collegate alla segnalazione EGFR/ERBB, all’adesione mediata da integrine e ai programmi migratori. Un’attività e un’espressione disregolate di ADAM9 sono state associate a fenotipi invasivi, microambienti infiammatori e a un rimodellamento tissutale alterato, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla biologia tumorale e sui processi di rimodellamento legati alle malattie croniche.

ADAM9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADAM9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ADAM9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADAM9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADAM9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ADAM9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADAM9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ADAM9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ADAM9 nelle cellule tumorali con espressione di ADAM9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.