ACTG2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400007-ACT

ACTG2 codifica l’actina gamma-2 del muscolo liscio, un componente fondamentale dell’apparato contrattile nelle cellule muscolari lisce viscerali, dove polimerizza in filamenti di actina che supportano la generazione di forza e l’integrità del citoscheletro. ACTG2 partecipa alla dinamica actomiosinica e a processi dipendenti dal citoscheletro, inclusi la contrazione del muscolo liscio, il controllo della forma cellulare e la meccanotrasduzione, interagendo funzionalmente con la miosina e con proteine leganti l’actina lungo vie regolate da RhoA/ROCK. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ACTG2 sono associate a fenotipi di compromessa motilità della muscolatura liscia gastrointestinale e genitourinaria e sono state implicate nei disordini congeniti dello spettro delle miopatie viscerali. In quanto marcatore del muscolo liscio associato a linea cellulare e stato, ACTG2 viene anche impiegato per studiare programmi di differenziazione, rimodellamento del citoscheletro e fenotipi cellulari guidati dalla contrattilità.

ACTG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ACTG2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ACTG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ACTG2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ACTG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ACTG2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ACTG2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ACTG2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ACTG2 nelle cellule tumorali con espressione di ACTG2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.