ACTC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400008-ACT

ACTC1 codifica l’actina alfa cardiaca, un componente fondamentale del filamento sottile sarcomerico che polimerizza in F-actina per sostenere la generazione di forza e la meccanica contrattile nel muscolo striato. Interagendo con i motori della miosina e con regolatori che legano l’actina, ACTC1 contribuisce all’assemblaggio delle miofibrille, all’organizzazione del citoscheletro e alle vie di meccanotrasduzione che coordinano struttura e funzione dei cardiomiociti. Alterazioni dell’espressione di ACTC1 o dell’integrità dei filamenti possono modificare la dinamica del sarcomero e l’accoppiamento con la gestione del calcio, collegando questo gene a fenotipi di cardiomiopatia ereditaria e a difetti cardiaci congeniti. In quanto isoforma di actina arricchita nel muscolo, ACTC1 viene anche utilizzata per studiare il rimodellamento del citoscheletro specifico per isoforma e le risposte allo stress in modelli di muscolo cardiaco e scheletrico.

ACTC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ACTC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ACTC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ACTC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ACTC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ACTC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ACTC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ACTC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ACTC1 nelle cellule tumorali con espressione di ACTC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.