ACTA2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400003-NIC

ACTA2 codifica l’actina α del muscolo liscio (ACTA2), una proteina fondamentale dei filamenti contrattili, particolarmente arricchita nelle cellule muscolari lisce vascolari e nei miofibroblasti. Polimerizzando in fibre di stress di F-actina e interagendo con i motori della miosina, ACTA2 sostiene la tensione del citoscheletro, la dinamica delle adesioni focali e i programmi di meccanotrasduzione che modellano la migrazione cellulare e il rimodellamento della matrice extracellulare. L’attività di ACTA2 si intreccia con la segnalazione RhoA/ROCK, la differenziazione guidata da TGF-β e il controllo trascrizionale SRF/MRTF dell’espressione dei geni contrattili. La deregolazione o le mutazioni di ACTA2 sono implicate nella disfunzione della muscolatura liscia vascolare e in fenotipi di rimodellamento, incluso l’aumento del rischio di aneurisma/dissezione dell’aorta toracica, e sono ampiamente studiate nei contesti di fibrosi e contrattilità anomala.

ACTA2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACTA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACTA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACTA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACTA2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.