ACTA2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400003

Panoramica

ACTA2 codifica l’actina alfa della muscolatura liscia (α-SMA), un componente fondamentale dell’apparato contrattile nelle cellule muscolari lisce vascolari e nei miofibroblasti attivati. ACTA2 si integra nelle fibre di stress di actina per regolare la contrattilità cellulare, l’organizzazione del citoscheletro e la meccanotrasduzione, influenzando processi quali migrazione, adesione e rimodellamento della matrice extracellulare. Attraverso la dinamica dell’actina e la segnalazione contrattile dipendente da RhoA/ROCK, ACTA2 contribuisce al tono vascolare e alle risposte di rigidità tissutale. Un’espressione o una funzione di ACTA2 deregolate sono associate alla patobiologia vascolare e al rimodellamento fibroproliferativo, a conferma della sua rilevanza negli studi sulla differenziazione della muscolatura liscia e sui fenotipi associati alla fibrosi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTA2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ACTA2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ACTA2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ACTA2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACTA2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ACTA2 per lo studio della segnalazione di ACTA2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ACTA2 critici per la funzione di ACTA2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ACTA2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACTA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ACTA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ACTA2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACTA2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ACTA2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ACTA2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ACTA2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.