Acrp30 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401327-ACT

ADIPOQ codifica l’adipochina Acrp30 (adiponectina), una proteina secreta prodotta principalmente dagli adipociti, che circola sotto forma di complessi multimerici e regola l’omeostasi energetica sistemica. Acrp30 interagisce con recettori quali ADIPOR1/ADIPOR2 per modulare le vie di segnalazione di AMPK e PPARα, promuovendo l’ossidazione degli acidi grassi, l’utilizzo del glucosio e programmi antinfiammatori nei tessuti metabolici. Alterazioni dell’espressione di ADIPOQ e della segnalazione dell’adiponectina sono associate a insulino-resistenza, disfunzione metabolica correlata all’obesità, steatosi epatica non alcolica e fenotipi di rischio cardiovascolare. Nei modelli cellulari, ADIPOQ viene utilizzato per studiare la differenziazione degli adipociti, la secrezione di adipochine e il crosstalk tra tessuto adiposo e le vie epatiche, muscolari e immunitarie.

Acrp30 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADIPOQ senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Acrp30 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADIPOQ nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADIPOQ, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Acrp30. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADIPOQ nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Acrp30 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Acrp30 nelle cellule tumorali con espressione di ADIPOQ silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.