Acrp30 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401327-ACT

ADIPOQ codifica a adipocina Acrp30 (adiponectina), uma proteína secretada produzida principalmente por adipócitos que circula como complexos multiméricos e regula a homeostase energética sistêmica. A Acrp30 interage com receptores como ADIPOR1/ADIPOR2 para modular a sinalização de AMPK e PPARα, promovendo a oxidação de ácidos graxos, a utilização de glicose e programas anti-inflamatórios em tecidos metabólicos. Alterações na expressão de ADIPOQ e na sinalização da adiponectina estão associadas à resistência à insulina, à disfunção metabólica relacionada à obesidade, à doença hepática gordurosa não alcoólica e a fenótipos de risco cardiovascular. Em modelos celulares, ADIPOQ é utilizado para investigar a diferenciação de adipócitos, a secreção de adipocinas e a comunicação entre o tecido adiposo e vias do fígado, do músculo e do sistema imune.

Acrp30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADIPOQ sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Acrp30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADIPOQ em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADIPOQ, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Acrp30. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADIPOQ nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Acrp30 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Acrp30 em células tumorais com expressão de ADIPOQ silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.