ACOT11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435977-ACT

Acot11 codifica a acil-CoA tioesterase 11 (ACOT11), uma enzima mitocondrial do metabolismo lipídico que hidrolisa acil-CoAs de ácidos graxos de cadeia longa em ácidos graxos livres e CoA, moldando assim o tamanho do pool de acil-CoA e o fluxo subsequente da β-oxidação. Ao modular a disponibilidade de substratos na mitocôndria e intermediários de sinalização lipídica, a ACOT11 influencia o balanço energético, o metabolismo oxidativo e o manejo de lipídios no tecido adiposo. Em sistemas murinos, alterações na atividade da ACOT11 têm sido associadas a fenótipos metabólicos envolvendo termogênese e utilização de nutrientes, tornando-a relevante para o estudo da função mitocondrial, da homeostase de ácidos graxos e das respostas ao estresse metabólico.

ACOT11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Acot11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACOT11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Acot11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Acot11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACOT11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Acot11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACOT11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACOT11 em células tumorais com expressão de Acot11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.