ACOT11 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-435977-ACT

Acot11 codifica l’acil-CoA tioesterasi 11 (ACOT11), un enzima mitocondriale del metabolismo lipidico che idrolizza gli acil-CoA degli acidi grassi a catena lunga in acidi grassi liberi e CoA, contribuendo così a determinare la dimensione del pool di acil-CoA e il flusso della β-ossidazione a valle. Modulando la disponibilità mitocondriale dei substrati e gli intermedi della segnalazione lipidica, ACOT11 influenza l’equilibrio energetico, il metabolismo ossidativo e la gestione dei lipidi nel tessuto adiposo. Nei modelli murini, alterazioni dell’attività di ACOT11 sono state associate a fenotipi metabolici che coinvolgono termogenesi e utilizzo dei nutrienti, rendendolo rilevante per lo studio della funzione mitocondriale, dell’omeostasi degli acidi grassi e delle risposte allo stress metabolico.

ACOT11 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Acot11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ACOT11 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Acot11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Acot11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ACOT11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Acot11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ACOT11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ACOT11 nelle cellule tumorali con espressione di Acot11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.