Plasmide CRISPR d'Activation (h) ABCA3: sc-402388-ACT

ABCA3 (ATP-binding cassette, sous-famille A, membre 3) est un transporteur de lipides principalement exprimé dans les cellules épithéliales alvéolaires de type II, où il se localise aux corps lamellaires et participe au trafic et à l’empaquetage des phospholipides du surfactant. En tant que transporteur ABC dépendant de l’ATP, ABCA3 contribue à l’homéostasie des lipides membranaires intracellulaires et à des processus de transport vésiculaire essentiels à la physiologie pulmonaire. Une perturbation ou une diminution de l’activité d’ABCA3 est associée à une altération du métabolisme du surfactant et a été liée à la détresse respiratoire néonatale ainsi qu’à des phénotypes de pneumopathie interstitielle. La biologie d’ABCA3 est donc largement étudiée dans des voies impliquant la biogenèse des corps lamellaires, le traitement du surfactant, ainsi que la différenciation des cellules épithéliales et les réponses au stress.

ABCA3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCA3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ABCA3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCA3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCA3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ABCA3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCA3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ABCA3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ABCA3 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCA3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.