ABCA3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402388-ACT

ABCA3 (ATP binding cassette, sottofamiglia A, membro 3) è un trasportatore di lipidi espresso prevalentemente nelle cellule epiteliali alveolari di tipo II, dove si localizza nei corpi lamellari e sostiene il traffico e l’impacchettamento dei fosfolipidi del surfattante. In quanto trasportatore ABC dipendente dall’ATP, ABCA3 contribuisce all’omeostasi dei lipidi di membrana intracellulari e ai processi di trasporto vescicolare essenziali per la fisiologia polmonare. L’alterazione o la riduzione dell’attività di ABCA3 è associata a un metabolismo del surfattante compromesso ed è stata collegata alla distress respiratorio neonatale e a fenotipi di malattia polmonare interstiziale. La biologia di ABCA3 è quindi ampiamente studiata in vie che coinvolgono la biogenesi dei corpi lamellari, la maturazione del surfattante e la differenziazione delle cellule epiteliali, oltre alle risposte allo stress.

ABCA3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ABCA3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ABCA3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ABCA3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ABCA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ABCA3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ABCA3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ABCA3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ABCA3 nelle cellule tumorali con espressione di ABCA3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.