ABCA2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418931

Panoramica

Abca2 codifica ABCA2, un trasportatore della famiglia ATP-binding cassette localizzato prevalentemente nelle membrane endolisosomiali nelle cellule di topo, dove contribuisce alla gestione intracellulare dei lipidi e al traffico vescicolare. ABCA2 è stato collegato alla regolazione dell’omeostasi di colesterolo e sfingolipidi, influenzando la composizione di membrana e processi quali endocitosi, funzione lisosomiale e biologia lipidica associata alla mielina. Un’attività alterata di ABCA2 è stata associata, in sistemi sperimentali, alla biologia neuronale e gliale, a vie rilevanti per la neurodegenerazione e a fenotipi di resistenza multidrug. Di conseguenza, Abca2 è spesso studiato in contesti che collegano il trasporto lipidico alle risposte allo stress, alla proteostasi e alla vulnerabilità specifica dei diversi tipi cellulari nel sistema nervoso.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ABCA2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Abca2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Abca2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Abca2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ABCA2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Abca2 per lo studio della segnalazione di ABCA2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Abca2 critici per la funzione di ABCA2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Abca2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ABCA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ABCA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Abca2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ABCA2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ABCA2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Abca2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Abca2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.