5-LO CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-401239

개요

ALOX5는 5-리폭시게네이스(5-LO)를 암호화하는 유전자이며, 5-LO는 비헴 철(non-heme iron) 의존성 이산소화효소로서 아라키돈산 대사에서 류코트리엔 A4로 이어지는 최초의 본격적인(irreversible/committed) 단계를 촉매하고, 이후 류코트리엔 A4는 생리활성 류코트리엔으로 전환됩니다. 5-LO 활성은 세포 내 칼슘 유동, FLAP(ALOX5AP)과의 막 결합, 인산화 의존적 신호전달, 그리고 산화환원 상태에 의해 조절되며, 이로 인해 선천면역 활성화 및 염증성 지질 매개체 네트워크와 연결됩니다. CysLT 및 BLT 수용체를 통한 류코트리엔 신호는 백혈구의 유주(chemotaxis), 혈관 투과성, 사이토카인 분비를 조절하여 ALOX5를 천식 및 알레르기성 염증, 동맥경화, 종양 연관 염증과 관련된 경로에 위치시킵니다. 또한 ALOX5 발현 또는 경로 플럭스의 이상은 산화 스트레스, 대식세포 극화, 그리고 사이클로옥시게네이스 유래 프로스타노이드와의 아이코사노이드 크로스토크를 연구하는 실험에서 기전적 지표(readout)로도 활용됩니다.

5-LO CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 ALOX5 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 ALOX5 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 ALOX5의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 5-LO 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 5-LO 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 ALOX5 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• 5-LO 기능에 중요한 ALOX5 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 ALOX5 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• 5-LO CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 5-LO CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 ALOX5 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  5-LO HDR 플라스미드 (h) 및 5-LO HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 ALOX5 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 ALOX5 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.