20S Proteasome α7 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401897-LAC

PSMA7 codifica la subunità α7 del proteasoma 20S, un componente strutturale essenziale della particella centrale 20S che contribuisce all’assemblaggio del proteasoma e alla formazione del canale di ingresso “a cancello” che controlla l’accesso dei substrati. Attraverso il sistema ubiquitina–proteasoma, α7 sostiene il turnover proteico ATP-dipendente che regola la progressione del ciclo cellulare, la trasduzione del segnale, l’elaborazione degli antigeni per la presentazione tramite MHC di classe I e la proteostasi in condizioni di stress ossidativo o proteotossico. Alterazioni nella composizione o nell’attività del proteasoma possono rimodellare la degradazione di proteine regolatorie chiave e influenzare vie come la segnalazione di NF-κB, le risposte al danno al DNA e l’apoptosi. Un’omeostasi del proteasoma alterata, inclusi cambiamenti nell’espressione di PSMA7, è stata riportata in molteplici contesti rilevanti per la malattia in cui proteostasi e sorveglianza immunitaria risultano disregolate, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi di biologia del proteasoma.

Le particelle di attivazione lentivirale 20S Proteasome α7 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PSMA7 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale 20S Proteasome α7 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PSMA7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di 20S Proteasome α7. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PSMA7 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.