γB-crystallin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402939

Panoramica

CRYGB codifica la γB-cristallina, una proteina strutturale solubile altamente abbondante del cristallino dei vertebrati, che contribuisce all’indice di rifrazione e alla trasparenza del cristallino nel lungo periodo. La γB-cristallina partecipa all’assemblaggio della rete delle cristalline e ai processi di omeostasi proteica che mantengono l’integrità delle cellule delle fibre del cristallino, in cui l’impacchettamento serrato e la stabilità sono essenziali per ridurre al minimo la dispersione della luce. L’alterazione della stabilità delle cristalline o una maggiore suscettibilità all’aggregazione sono associate a fenotipi di opacizzazione del cristallino, rendendo CRYGB un locus rilevante per studiare i meccanismi di misfolding proteico e di proteostasi nei tessuti oculari differenziati. Poiché le cellule delle fibre del cristallino sono in gran parte post-mitotiche, CRYGB rappresenta anche un modello per indagare come le proteine a lunga vita rispondano nel tempo allo stress ossidativo e ambientale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO γB-crystallin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CRYGB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CRYGB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CRYGB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina γB-crystallin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CRYGB per lo studio della segnalazione di γB-crystallin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CRYGB critici per la funzione di γB-crystallin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CRYGB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal γB-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal γB-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CRYGB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal γB-crystallin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR γB-crystallin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CRYGB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CRYGB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.