βB1-crystallin Plasmide Double Nickase (h): sc-403361-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- βB1-crystallin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il βB1-crystallin Double Nickase Plasmid (h) e il βB1-crystallin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CRYBB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: βB1-crystallin Antibody (A-8): sc-374496
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
βB1-crystallin Plasmide Double Nickase (h) | sc-403361-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
βB1-crystallin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403361-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRYBB1 codifica la βB1-cristallina umana, una delle principali proteine strutturali del cristallino, che contribuisce all’elevato indice di rifrazione e alla trasparenza a lungo termine necessari per la visione. La βB1-cristallina partecipa alla rete proteica delle cristalline formando oligomeri stabili con altre β/γ-cristalline, sostenendo l’architettura delle cellule delle fibre del cristallino e l’omeostasi proteica. L’alterazione dell’assemblaggio delle cristalline o una maggiore suscettibilità all’aggregazione possono compromettere la trasparenza del cristallino, rendendo CRYBB1 un locus chiave per lo studio della proteostasi, delle risposte allo stress e dei cambiamenti legati all’età nella biologia del cristallino. Varianti che influenzano stabilità e solubilità della βB1-cristallina sono state associate a fenotipi di cataratta ereditaria, fornendo un contesto genetico per studi meccanicistici in modelli oculari.
βB1-crystallin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRYBB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRYBB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRYBB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRYBB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.