β2C Tubulin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400056-ACT

TUBB4B codifica a tubulina β2C, um isótipo central de β-tubulina que polimeriza com α-tubulinas para formar microtúbulos, sustentando a arquitetura do citoesqueleto, o transporte intracelular e a montagem do fuso mitótico. A dinâmica dos microtúbulos, impulsionada por heterodímeros de tubulina, regula a progressão do ciclo celular, o tráfego vesicular e a organização de prolongamentos neuronais por meio de vias que envolvem proteínas motoras como cinesinas e dineínas. Alterações na expressão de isótipos de tubulina e a remodelação de microtúbulos são frequentemente estudadas em contextos de instabilidade cromossômica, comprometimento da polaridade celular e respostas ao estresse que acompanham a transformação oncogênica. Como os microtúbulos são centrais para a divisão e a migração, TUBB4B é amplamente relevante para pesquisas sobre regulação do citoesqueleto, diferenciação e fenótipos conduzidos pelo microambiente.

β2C Tubulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TUBB4B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β2C Tubulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TUBB4B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TUBB4B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β2C Tubulin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TUBB4B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β2C Tubulin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β2C Tubulin em células tumorais com expressão de TUBB4B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.