β-1,4-Gal-T1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403299-NIC

B4GALT1 codifica per la β-1,4-Gal-T1 umana, una glicosiltransferasi residente nel Golgi che trasferisce galattosio alla N-acetilglucosamina per generare strutture Galβ1-4GlcNAc (LacNAc) su glicani N- e O-legati e su glicolipidi. Questa attività sostiene la maturazione dei glicani lungo la via secretoria e modella i pattern di glicosilazione della superficie cellulare, influenzando il ripiegamento e il traffico delle proteine, la segnalazione mediata dai recettori e le interazioni cellula–cellula o cellula–matrice. La funzione della β-1,4-Gal-T1 si intreccia con processi dipendenti dalla glicosilazione quali il legame alle lectine, il riconoscimento immunitario e il rimodellamento della matrice extracellulare. Alterazioni dell’attività di B4GALT1 e dell’abbondanza di LacNAc sono state associate a una funzione glicoproteica deregolata osservata in diversi contesti rilevanti per la malattia, inclusi disturbi congeniti della glicosilazione e cambiamenti del glicoma associati alle neoplasie.

β-1,4-Gal-T1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus B4GALT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di B4GALT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di B4GALT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con B4GALT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.