α_2B-AR Plasmide Double Nickase (h): sc-403430-NIC

ADRA2B codifica il recettore adrenergico umano alfa2B (α2B-AR), un GPCR accoppiato a Gi/o che risponde alle catecolamine modulando l’attività dell’adenilil ciclasi, i livelli intracellulari di cAMP e la segnalazione a valle dipendente da PKA. L’attivazione del recettore può anche coinvolgere le vie MAPK/ERK e quelle collegate a PI3K tramite meccanismi mediati da proteine G e da β-arrestina, plasmando risposte cellulari quali il rilascio di neurotrasmettitori, la contrattilità della muscolatura liscia e il tono vascolare. In contesti immunitari e metabolici, la segnalazione di α2B-AR influenza programmi trascrizionali responsivi allo stress e il cross-talk con altri recettori neuromodulatori. Variazioni genetiche e di espressione di ADRA2B sono state studiate in relazione a fenotipi neurocomportamentali e alla regolazione cardiovascolare, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici delle reti di segnalazione adrenergica.

α2B-AR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADRA2B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADRA2B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADRA2B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADRA2B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.