Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
αENaC Plasmide Double Nickase (m): sc-422825-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- αENaC Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il αENaC Double Nickase Plasmid (m) e il αENaC Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Scnn1a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
αENaC Plasmide Double Nickase (m) | sc-422825-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
αENaC Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422825-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Scnn1a codifica la subunità alfa del canale epiteliale del sodio murino (αENaC), un componente centrale che forma il poro di ENaC e che media l’assorbimento di Na⁺ sensibile all’amiloride attraverso gli epiteli. Il flusso di sodio dipendente da αENaC contribuisce al trasporto ionico transepiteliale, al movimento osmotico dell’acqua e alla regolazione del potenziale di membrana nel rene, nelle vie aeree e in altri tessuti epiteliali. L’attività di ENaC è strettamente controllata dal processamento proteolitico e dal turnover dipendente dall’ubiquitina, inclusa la modulazione da parte di NEDD4L e della segnalazione di SGK1 in risposta a ormoni come l’aldosterone. Una funzione disregulated di ENaC è associata ad alterazioni dell’omeostasi di sali e fluidi ed è ampiamente studiata in modelli di idratazione della superficie delle vie aeree polmonari e di gestione del sodio a livello renale.
αENaC Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Scnn1a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Scnn1a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Scnn1a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Scnn1a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.