ZNF282 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409149-ACT

ZNF282 codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco implicato nel legame al DNA in modo sequenza-specifico e nella regolazione di programmi di espressione genica che influenzano lo stato cellulare e la differenziazione. In quanto proteina regolatoria nucleare, ZNF282 è associato a processi di controllo trascrizionale coordinati dalla RNA polimerasi II e da cofattori associati alla cromatina, sostenendo un’attivazione o una repressione dei target a valle dipendente dal contesto. Un’espressione alterata di ZNF282 è stata riportata in studi trascrittomici e funzionali in molteplici contesti tumorali, in linea con ruoli nella proliferazione, in reti geniche associate all’invasione e nelle risposte allo stress cellulare. Queste caratteristiche rendono ZNF282 un nodo utile per indagare i circuiti trascrizionali, la regolazione epigenetica e il rimodellamento delle vie di segnalazione nelle cellule umane.

ZNF282 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZNF282 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZNF282 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZNF282 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZNF282, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZNF282. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZNF282 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZNF282 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZNF282 nelle cellule tumorali con espressione di ZNF282 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.