ZFHX4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408957-ACT

ZFHX4 (zinc finger homeobox 4) codifica un grande fattore di trascrizione nucleare con molteplici domini di legame al DNA di tipo zinc finger e homeobox, che modula programmi di espressione genica responsabili dell’identità e della differenziazione cellulare. Partecipa a reti di regolazione trascrizionale legate a processi di neurosviluppo e di linea epiteliale, influenzando lo stato della cromatina e gli output a valle delle vie di segnalazione. Un’espressione deregolata di ZFHX4 o la presenza di mutazioni è stata associata, in diversi contesti, a traiettorie di differenziazione alterate e alla biologia tumorale, sostenendone l’utilità come nodo molecolare per lo studio del rimodellamento trascrizionale oncogenico. L’analisi funzionale di ZFHX4 aiuta a chiarire come i fattori di trascrizione integrino segnali di sviluppo con il controllo del ciclo cellulare e con vie adattative allo stress.

ZFHX4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZFHX4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZFHX4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZFHX4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZFHX4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZFHX4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZFHX4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZFHX4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZFHX4 nelle cellule tumorali con espressione di ZFHX4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.