ZDHHC5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411833-ACT

ZDHHC5 codifica una palmitoiltransferasi della famiglia DHHC che catalizza la S-palmitoilazione di proteine associate alla membrana, regolando il loro traffico, la stabilità e la compartimentalizzazione a livello della membrana plasmatica e dei sistemi endosomiali. Attraverso il controllo di cicli dinamici di lipidazione, ZDHHC5 influenza la trasduzione del segnale, l’organizzazione dei recettori sinaptici e immunitari e il rimodellamento del citoscheletro, con effetti a valle sull’adesione e sulla migrazione cellulare. Reti di palmitoilazione deregolate che coinvolgono ZDHHC5 sono state collegate ad alterazioni della segnalazione neuronale e alla modulazione di vie oncogeniche, rendendolo rilevante per studi di neurobiologia e del comportamento delle cellule tumorali. In quanto enzima localizzato alla membrana, ZDHHC5 viene spesso studiato nel contesto della localizzazione proteica, del trasporto vescicolare e della segnalazione dipendente da modificazioni post-traduzionali.

ZDHHC5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZDHHC5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZDHHC5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZDHHC5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZDHHC5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZDHHC5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZDHHC5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZDHHC5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZDHHC5 nelle cellule tumorali con espressione di ZDHHC5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.