ZC3H4 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-436020-ACT

Mouse Zc3h4 codifica ZC3H4, una proteina legante l’RNA di tipo zinc finger CCCH, implicata nel metabolismo dell’RNA nucleare e nel controllo della trascrizione. Evidenze emergenti collegano ZC3H4 alla regolazione della trascrizione in prossimità del promotore e al processamento dell’RNA in elementi regolatori, influenzando programmi di espressione genica che modellano le transizioni dello stato cellulare. Attraverso il coordinamento della sorveglianza dell’RNA e dei processi trascrizionali associati alla cromatina, ZC3H4 è rilevante per vie che governano la differenziazione, l’espressione genica in risposta allo stress e la regolazione del genoma. La disregolazione di questi meccanismi è ampiamente associata a fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi un controllo proliferativo alterato e instabilità trascrizionale in contesti oncologici e del neurosviluppo.

ZC3H4 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Zc3h4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZC3H4 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Zc3h4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Zc3h4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZC3H4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Zc3h4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZC3H4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZC3H4 nelle cellule tumorali con espressione di Zc3h4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.