YDJC Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-414675-ACT-2

Il gene umano YDJC codifica una proteina conservata, putativamente appartenente alla famiglia delle deacetilasi/epimerasi, implicata nell’elaborazione dei metaboliti cellulari e nel mantenimento della proteostasi, con evidenze che ne supportano il ruolo nell’equilibrio redox e nelle risposte adattative allo stress. YDJC è stato associato alla modulazione del controllo di qualità delle proteine e di vie omeostatiche legate ai mitocondri, risultando quindi rilevante per studi sullo stress ossidativo, sulla segnalazione associata all’infiammazione e sul rimodellamento metabolico. Alterazioni dell’espressione di YDJC sono state riportate in molteplici contesti patologici, inclusi il cancro e firme molecolari associate alla neurodegenerazione, suggerendone l’utilità come nodo meccanicistico per investigare la deregolazione della resilienza cellulare. L’editing genetico di YDJC consente l’analisi funzionale del suo contributo alle reti metaboliche e di risposta allo stress, supportando esperimenti di mappatura delle vie, analisi genotipo–fenotipo e generazione di modelli per studi a livello di sistema sulla regolazione dello stato cellulare.

YDJC Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di YDJC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

YDJC Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus YDJC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione YDJC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di YDJC. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus YDJC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da YDJC nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via YDJC nelle cellule tumorali con espressione di YDJC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.