WSTF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404237-ACT

Il gene umano **BAZ1B** codifica il fattore di trascrizione della sindrome di Williams (**WSTF**), una proteina nucleare associata alla cromatina che integra il rimodellamento dipendente da ATP con la fosforilazione dell’istone H2A.X durante le risposte al danno del DNA. WSTF agisce nel complesso **WICH** insieme a **SMARCA5** e contribuisce anche al rimodellamento della cromatina della famiglia **ISWI**, collegando il posizionamento dei nucleosomi alla regolazione della trascrizione e al mantenimento della cromatina associato alla replicazione. Attraverso queste attività, BAZ1B influenza la stabilità del genoma, la progressione del ciclo cellulare e i programmi di espressione genica dipendenti dall’RNA polimerasi II. Alterazioni del dosaggio di BAZ1B e stati di cromatina deregolati dipendenti da WSTF sono stati associati a fenotipi di neurosviluppo e a più ampie perturbazioni trascrizionali rilevanti per la biologia delle malattie.

WSTF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BAZ1B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WSTF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BAZ1B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BAZ1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WSTF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BAZ1B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WSTF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WSTF nelle cellule tumorali con espressione di BAZ1B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.