WIPI-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-411876-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- WIPI-2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il WIPI-2 Double Nickase Plasmid (h) e il WIPI-2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira WIPI2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
WIPI-2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-411876-NIC | 20 µg | $410.00 |
WIPI2 codifica WIPI-2, una proteina della famiglia PROPPIN capace di legare il fosfatidilinositolo 3-fosfato, che funge da impalcatura precoce nella macroautofagia. WIPI-2 recluta e organizza il complesso ATG12–ATG5–ATG16L1 per favorire la lipidazione di LC3 e l’espansione della membrana dell’autofagosoma a valle della segnalazione della PI3K di classe III. Attraverso questi ruoli, WIPI-2 contribuisce alla proteostasi, al controllo qualità degli organelli e all’adattamento cellulare allo stress da carenza di nutrienti. Un’autofagia dipendente da WIPI2 deregolata è stata studiata in contesti che includono neurodegenerazione, biologia delle infezioni e metabolismo delle cellule tumorali, dove un flusso autofagico alterato può influenzare la sopravvivenza e la segnalazione infiammatoria.
WIPI-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WIPI2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WIPI2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WIPI2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WIPI2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.