WAPL Plasmide Double Nickase (m): sc-432331-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- WAPL Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il WAPL Double Nickase Plasmid (m) e il WAPL Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Wapl. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
WAPL Plasmide Double Nickase (m) | sc-432331-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WAPL Plasmide Double Nickase (m2) | sc-432331-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Wapl** codifica **WAPL**, un fattore di rilascio della coesina che promuove l’apertura dell’anello della coesina e regola il tempo di permanenza della coesina sulla cromatina. Controllando la dinamica della coesina, WAPL influenza la coesione delle cromatidi sorelle, la progressione mitotica, la tempistica di replicazione del DNA e l’organizzazione del genoma a livello superiore che modella i programmi trascrizionali. La funzione di WAPL si integra con vie che regolano la segregazione cromosomica, le risposte al danno al DNA e la formazione di loop cromatinici, rendendolo un nodo chiave per la stabilità del genoma. Un ricambio della coesina deregolato e un’attività alterata di WAPL sono stati associati ad aneuploidia, stress replicativo e fenotipi di sviluppo legati alle coesinopatie, a sostegno della sua rilevanza nei modelli di biologia delle malattie.
WAPL Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Wapl nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Wapl. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Wapl. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Wapl interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.