VDAC3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404240-ACT

VDAC3 (proteina 3 del canale anionico selettivo voltaggio-dipendente) è una porina della membrana esterna mitocondriale che contribuisce allo scambio di metaboliti e ioni tra citosol e mitocondri, influenzando la fosforilazione ossidativa e la bioenergetica cellulare. Come parte della famiglia dei canali anionici voltaggio-dipendenti, partecipa alla regolazione della permeabilità della membrana mitocondriale, dell’equilibrio redox e del cross-talk con le vie di segnalazione apoptotiche. VDAC3 è stato associato a processi di controllo qualità mitocondriale e alle risposte allo stress ossidativo, con particolare rilevanza per i tessuti ad alta richiesta energetica. La disregolazione del trasporto e della segnalazione mitocondriale che coinvolge VDAC3 è di interesse negli studi su neurodegenerazione, disfunzione cardiometabolica, infertilità e rimodellamento metabolico associato al cancro.

VDAC3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VDAC3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

VDAC3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VDAC3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VDAC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di VDAC3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VDAC3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da VDAC3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via VDAC3 nelle cellule tumorali con espressione di VDAC3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.