VDAC3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404240-ACT

VDAC3 (spannungsabhängiger anionenselektiver Kanalprotein 3) ist ein Porin in der äußeren Mitochondrienmembran, das zum Austausch von Metaboliten und Ionen zwischen Zytosol und Mitochondrien beiträgt und damit die oxidative Phosphorylierung sowie die zelluläre Bioenergetik beeinflusst. Als Mitglied der Familie der spannungsabhängigen Anionenkanäle wirkt es an der Regulation der Permeabilität der Mitochondrienmembran, des Redoxgleichgewichts und der Wechselwirkung mit apoptotischen Signalwegen mit. VDAC3 wird mit Prozessen der mitochondrialen Qualitätskontrolle und mit Antworten auf oxidativen Stress in Verbindung gebracht, insbesondere in Geweben mit hohem Energiebedarf. Eine Fehlregulation des mitochondrialen Transports und der Signalübertragung unter Beteiligung von VDAC3 ist von Interesse in Studien zu Neurodegeneration, kardiometabolischer Dysfunktion, Unfruchtbarkeit und krebsassoziiertem metabolischem Remodeling.

VDAC3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen VDAC3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

VDAC3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des VDAC3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der VDAC3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen VDAC3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native VDAC3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von VDAC3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des VDAC3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem VDAC3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.