U2AF65 Plasmide Double Nickase (m): sc-423572-NIC

U2af2 codifica la proteina murina U2AF65, un fattore essenziale di splicing legante l’RNA che riconosce il tratto polipirimidinico nei siti di splicing 3′ e contribuisce al reclutamento dello snRNP U2 nelle fasi iniziali dell’assemblaggio dello spliceosoma. Attraverso i suoi motivi di riconoscimento dell’RNA e le interazioni con U2AF35 e SF1, U2AF65 coordina la definizione degli esoni e le decisioni di splicing alternativo che determinano la produzione di isoforme trascrittomiche in numerose vie di segnalazione e del ciclo cellulare. La perturbazione dello splicing dipendente da U2AF65 può alterare la maturazione dell’mRNA, l’esportazione nucleare e la composizione del proteoma, rendendo U2af2 un nodo chiave per lo studio della fedeltà dei processi di elaborazione dell’RNA. Programmi di splicing deregolati e squilibri nei fattori dello spliceosoma sono ampiamente implicati nella biologia dei tumori ematologici e solidi, così come nei meccanismi di malattie del neurosviluppo e neurodegenerative, a sostegno dell’impiego di modelli U2af2 per esplorare reti di splicing rilevanti per la patologia.

U2AF65 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus U2af2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di U2af2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di U2af2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con U2af2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.