TRPC6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401205-ACT

TRPC6 umano codifica un canale cationico non selettivo della famiglia dei transient receptor potential, permeabile al Ca2+, che viene attivato a valle della segnalazione della fosfolipasi C e del diacilglicerolo. L’ingresso di Ca2+ mediato da TRPC6 sostiene l’entrata di calcio operata dal recettore (receptor-operated calcium entry), modellando le dinamiche del calcio intracellulare che regolano il rimodellamento del citoscheletro, la contrattilità e programmi di trascrizione genica come la segnalazione dipendente da NFAT. Il canale è implicato in vie meccanosensibili e collegate ai GPCR nei podociti renali e nella muscolatura liscia vascolare, e un’alterata attività di TRPC6 è associata a fenotipi di nefropatia proteinurica e al rimodellamento cardiovascolare. TRPC6 è inoltre studiato in contesti di proliferazione e migrazione calcio-dipendenti, risultando rilevante per diversi workflow di ricerca su segnalazione cellulare e canali ionici.

TRPC6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TRPC6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TRPC6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TRPC6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TRPC6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TRPC6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TRPC6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TRPC6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TRPC6 nelle cellule tumorali con espressione di TRPC6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.