TRPC6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401205-ACT

ヒトTRPC6は、ホスホリパーゼCシグナルおよびジアシルグリセロールの下流で活性化される、非選択的でCa2+透過性を有する一過性受容体電位（TRP）カチオンチャネルをコードします。TRPC6を介したCa2+流入は受容体作動性カルシウム流入（ROCE）を支え、細胞内カルシウム動態を形成することで、細胞骨格の再編成、収縮性、ならびにNFAT依存性シグナルなどの遺伝子転写プログラムを制御します。本チャネルは、腎臓のポドサイトや血管平滑筋における機械受容性経路およびGPCR連関経路に関与しており、TRPC6活性の変化は蛋白尿を伴う腎疾患表現型や心血管リモデリングと関連します。さらにTRPC6は、カルシウム依存的な増殖や遊走の文脈でも研究されており、多様な細胞シグナル伝達およびイオンチャネル研究のワークフローにおいて重要な標的となっています。

TRPC6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRPC6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRPC6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRPC6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRPC6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRPC6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRPC6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRPC6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRPC6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRPC6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。