TRAIL Plasmide Double Nickase (m): sc-423498-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRAIL Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRAIL Double Nickase Plasmid (m) e il TRAIL Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tnfsf10. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRAIL Antibody (N2B2): sc-56245
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRAIL Plasmide Double Nickase (m) | sc-423498-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Tnfsf10** codifica **TRAIL** (TNF-related apoptosis-inducing ligand), una citochina transmembrana di tipo II della superfamiglia del TNF che, dopo processamento proteolitico, può funzionare anche in forma solubile. TRAIL attiva la segnalazione dei recettori della morte, promuovendo l’apoptosi estrinseca tramite l’attivazione della caspasi-8 dipendente da FADD, e può intersecarsi con l’amplificazione mitocondriale attraverso BID, modulando inoltre, in modo dipendente dal contesto, gli output delle vie NF-κB e MAPK. In immunologia, TRAIL contribuisce alla funzione effettrice dei linfociti citotossici, alla sorveglianza immunitaria e alla regolazione delle risposte infiammatorie, collegando l’attività di Tnfsf10 a studi sull’omeostasi tissutale e sull’eliminazione di cellule sottoposte a stress. La disregolazione della segnalazione di TRAIL è stata studiata in modelli di suscettibilità delle cellule tumorali, infiammazione autoimmune e immunopatologia legata alle infezioni, rendendo Tnfsf10 un nodo rilevante per l’analisi delle vie di segnalazione.
TRAIL Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tnfsf10 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tnfsf10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tnfsf10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tnfsf10 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.