TGase2 Plasmide Double Nickase (m): sc-423375-NIC

Il gene murino Tgm2 codifica la transglutaminasi 2 (TGase2), un enzima multifunzionale Ca²⁺-dipendente che catalizza reazioni di reticolazione proteica, deamidazione e poliaminazione, rimodellando così la matrice extracellulare e stabilizzando complessi proteici. TGase2 svolge anche la funzione di proteina di segnalazione legante il GTP e partecipa all’adesione mediata da integrine, alla dinamica del citoscheletro e alla regolazione delle risposte allo stress e infiammatorie associate a NF-κB e TGF-β. Attraverso queste attività, TGase2 influenza apoptosi, autofagia, riparazione delle ferite e rimodellamento fibrotico; inoltre, alterazioni nell’espressione o nell’attività di TGase2 sono state collegate a modelli di malattie infiammatorie, fibrosi tissutale, neurodegenerazione e biologia del microambiente tumorale. Tgm2 è quindi ampiamente utilizzato come punto di riferimento per studiare la biologia della matrice, la segnalazione immunitaria e l’adattamento cellulare allo stress nei sistemi murini.

TGase2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tgm2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tgm2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tgm2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tgm2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.