Tescalcin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408244-ACT

Il gene umano **TESC** codifica per la tescalcin, una proteina legante il Ca2+ con un motivo EF-hand che funge da modulatore della segnalazione nel citosol e a livello delle membrane. La tescalcin è stata implicata nell’accoppiamento dei flussi di calcio a reti di interazioni proteina–proteina che influenzano la segnalazione MAPK/ERK, la regolazione dei trasportatori ionici e i programmi di differenziamento cellulare, in particolare nelle linee ematopoietiche. Attraverso queste vie, **TESC** può influenzare proliferazione, migrazione e impegno di linea in modo dipendente dal contesto. Un’espressione alterata di **TESC** è stata riportata in stati trascrizionali rilevanti per il cancro e in fenotipi associati al differenziamento, rendendolo utile per studi meccanicistici sulla segnalazione calcio-dipendente e sulle reti regolatorie geniche.

Tescalcin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TESC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tescalcin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TESC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TESC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tescalcin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TESC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tescalcin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tescalcin nelle cellule tumorali con espressione di TESC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.