TCF-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423299-NIC

Tcf7 codifica il fattore di trascrizione T cell factor 1 (TCF-1), un effettore centrale della segnalazione canonica Wnt/β-catenina che si lega ai motivi TCF/LEF per regolare programmi genici che controllano lo sviluppo dei linfociti, stati di autorinnovamento di tipo “stem-like” e la specificazione di linea. Nelle cellule immunitarie murine, TCF-1 modella la maturazione dei timociti e la differenziazione delle cellule T periferiche coordinando l’accessibilità della cromatina e reti trascrizionali che integrano segnali delle vie Wnt, Notch e delle citochine. Un’attività disregolata di TCF-1 è stata implicata in alterazioni dell’omeostasi immunitaria e in fenotipi infiammatori; inoltre, i suoi ruoli a livello di pathway la rendono rilevante per studi di immunologia tumorale e di regolazione ematopoietica. In quanto regolatore nucleare che si lega al DNA, TCF-1 viene anche utilizzato come nodo per interrogare circuiti trascrizionali specifici di contesto e il controllo epigenetico nella modellazione dello sviluppo e delle malattie.

TCF-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tcf7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tcf7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tcf7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tcf7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.