Tau Plasmide Double Nickase (h): sc-400136-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Tau Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Tau Double Nickase Plasmid (h) e il Tau Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MAPT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Tau Antibody (D-8): sc-166060
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Tau Plasmide Double Nickase (h) | sc-400136-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Tau Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400136-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAPT codifica la proteina tau umana associata ai microtubuli, una proteina neuronale che stabilizza e organizza le reti di microtubuli per sostenere il trasporto assonale, la crescita dei neuriti e la plasticità del citoscheletro. La funzione di tau è regolata da modificazioni post-traduzionali, tra cui la fosforilazione, che modulano il legame ai microtubuli e influenzano il traffico dipendente dal citoscheletro e le risposte allo stress. La disregolazione dell’omeostasi di tau e la sua aggregazione sono collegate alle tauopatie e, più in generale, alla biologia delle malattie neurodegenerative, in cui l’alterazione della dinamica dei microtubuli e della proteostasi si intreccia con la disfunzione sinaptica. MAPT è quindi ampiamente studiato nei pathway che governano la polarità neuronale, il rimodellamento del citoscheletro e il controllo qualità delle proteine.
Tau Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAPT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAPT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAPT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAPT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.