Tafazzin Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-426211-ACT

Il gene Taz del topo codifica la tafazzina, una transacilasi associata alla membrana interna mitocondriale che rimodella la cardiolipina e altri fosfolipidi per stabilire una composizione matura delle catene aciliche. Questo rimodellamento lipidico è cruciale per l’efficienza della fosforilazione ossidativa, l’organizzazione delle creste mitocondriali e la regolazione della dinamica mitocondriale e della mitofagia in condizioni di stress energetico. Un’alterazione dell’attività della tafazzina compromette l’omeostasi della cardiolipina, con conseguente riduzione della funzionalità della catena di trasporto degli elettroni e maggiore suscettibilità allo stress metabolico, rendendo Taz un nodo chiave nelle vie di controllo qualità mitocondriale. Nella ricerca biomedica, Taz è spesso studiato nel contesto del metabolismo lipidico mitocondriale, della bioenergetica e della segnalazione dipendente dalla cardiolipina, rilevanti per fenotipi neuromuscolari e cardiaci.

Tafazzin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Taz senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tafazzin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Taz nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Taz, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tafazzin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Taz nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tafazzin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tafazzin nelle cellule tumorali con espressione di Taz silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.