SYP/Synaptophysin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400487-ACT

SYP codifica la sinaptofisina, un’abbondante glicoproteina integrale di membrana delle vescicole sinaptiche che supporta la biogenesi e il traffico delle vescicole, nonché il rilascio di neurotrasmettitori tramite esocitosi regolata. Partecipa ai processi di ciclo delle vescicole presinaptiche, inclusi endocitosi, docking e fusione delle vescicole, ed è comunemente utilizzata come marcatore della densità sinaptica e della differenziazione neuronale. Le vie associate alla sinaptofisina intersecano la trasmissione sinaptica calcio-dipendente e il rimodellamento dei circuiti neuronali dipendente dall’attività. Un’alterata espressione di SYP è stata riportata in disturbi neurodegenerativi e neurosviluppo e viene frequentemente valutata negli studi di neuropatologia come indicatore dell’integrità sinaptica.

SYP/Synaptophysin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SYP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SYP/Synaptophysin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SYP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SYP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SYP/Synaptophysin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SYP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SYP/Synaptophysin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SYP/Synaptophysin nelle cellule tumorali con espressione di SYP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.