SUR-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401399-ACT

ABCC9 codifica il recettore della sulfonilurea 2 (SUR-2), una subunità regolatoria dei canali del potassio sensibili all’ATP (KATP) che collega lo stato energetico cellulare all’eccitabilità della membrana. Assemblandosi con subunità di canali del potassio inward-rectifier per formare complessi KATP funzionali, SUR-2 contribuisce a regolare finemente la conduttanza del potassio in risposta a nucleotidi e ligandi farmacologici, influenzando il tono della muscolatura liscia vascolare e l’attività elettrica cardiaca. Questo asse di segnalazione integra il sensing metabolico con l’omeostasi ionica e la risposta allo stress, incidendo su processi quali la vasodilatazione, la dinamica del potenziale d’azione e la protezione durante condizioni di sfida energetica. Varianti genetiche o una disregolazione di ABCC9 sono state associate a fenotipi cardiovascolari e sistemici che coinvolgono l’eccitabilità e la perfusione tissutale, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici sulla regolazione dei canali e sulla biologia cardiometabolica.

SUR-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ABCC9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SUR-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ABCC9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ABCC9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SUR-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ABCC9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SUR-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SUR-2 nelle cellule tumorali con espressione di ABCC9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.