STAMP2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-431182-LAC

Mouse Steap4 codifica STAMP2 (six-transmembrane protein of prostate 2), una metalloriduttasi localizzata nelle membrane cellulari che sostiene l’equilibrio redox di ferro e rame e collega il sensing dei nutrienti alla segnalazione infiammatoria. STAMP2 è stata implicata nella regolazione della funzione di adipociti e macrofagi, integrando segnali di stress metabolico con vie quali la segnalazione insulinica, l’infiammazione associata a NF-κB e l’omeostasi redox cellulare. Un’alterata espressione di STAMP2 è associata a fenotipi metabolici e infiammatori nel tessuto adiposo e nel fegato, rendendo Steap4 un nodo utile per studiare immunometabolismo e risposte allo stress ossidativo. Nella ricerca biomedica, STAMP2 offre uno strumento per analizzare come la gestione dei metalli e gli enzimi redox di membrana influenzino la produzione di citochine, il metabolismo lipidico e l’adattamento allo stress cellulare in modelli murini e sistemi cellulari.

Le particelle di attivazione lentivirale STAMP2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Steap4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale STAMP2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Steap4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di STAMP2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Steap4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.