ST8Sia III Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-407120-LAC

ST8SIA3 codifica la sialiltransferasi ST8Sia III, un enzima residente nell’apparato di Golgi che catalizza la sialilazione con legame α2,8 di glicoproteine e glicolipidi, plasmando la composizione e il riconoscimento dei glicani sulla superficie cellulare. Regolando la polisialilazione e determinanti sialilati correlati, ST8Sia III influenza le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice, l’organizzazione dei recettori e il traffico lungo le vie secretorie ed endocitiche. Pattern di sialilazione alterati sono associati a cambiamenti nell’adesione, nella migrazione e nel riconoscimento immunitario, rendendo ST8SIA3 rilevante per studi sui processi di neurosviluppo e sui fenotipi di glicosilazione associati ai tumori. L’analisi funzionale di ST8SIA3 può chiarire come la sialilazione α2,8 moduli le reti di segnalazione e la biologia delle glicoproteine di membrana nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ST8Sia III (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ST8SIA3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ST8Sia III (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ST8SIA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ST8Sia III. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ST8SIA3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.