SSX1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403551-ACT

SSX1 (sarcoma sinoviale, breakpoint X 1) codifica una proteina nucleare simile agli antigeni cancer-testis, coinvolta nella regolazione della trascrizione e in processi associati alla cromatina. Sono state riportate interazioni che la collegano alla repressione correlata ai complessi Polycomb e al controllo epigenetico dell’espressione genica. L’attività di SSX1 è associata alla modulazione di programmi di sviluppo, dell’identità cellulare e degli stati di differenziamento attraverso effetti sulle reti trascrizionali. L’espressione aberrante della famiglia SSX è particolarmente evidente nel sarcoma sinoviale tramite gli oncogeni di fusione SS18–SSX, che riorganizzano il rimodellamento della cromatina e i programmi trascrizionali. Di conseguenza, SSX1 è ampiamente studiato nella biologia dei tumori, nell’epigenetica e nei contesti di espressione di antigeni rilevanti per l’immuno-oncologia, come marcatore di una regolazione genica deregolata.

SSX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SSX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SSX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SSX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SSX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SSX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SSX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SSX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SSX1 nelle cellule tumorali con espressione di SSX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.