SREBP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423152-ACT

Il gene murino **Srebf1** codifica **SREBP-1**, un fattore di trascrizione **bHLH-LZ** (basic helix–loop–helix leucine zipper) ancorato alla membrana, che viene attivato tramite proteolisi per controllare i programmi genici anabolici dei lipidi. La forma attiva di SREBP-1 coordina la sintesi *de novo* di acidi grassi e trigliceridi inducendo bersagli quali **Acaca**, **Fasn**, **Scd1** e i geni **Elovl**, integrando segnali nutrizionali e ormonali attraverso la via **insulina–PI3K–AKT–mTORC1** e tramite crosstalk con i pathway **LXR** e **PPAR**. Modulando la composizione dei fosfolipidi e la biogenesi delle goccioline lipidiche, SREBP-1 influenza l’omeostasi del RE, la biosintesi delle membrane e l’adattamento metabolico. Un’attività deregolata di **SREBF1/SREBP-1** è frequentemente studiata in contesti quali steatosi epatica, insulino-resistenza associata all’obesità, rimodellamento del tessuto adiposo e programmi di lipogenesi e proliferazione delle cellule tumorali.

SREBP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Srebf1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SREBP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Srebf1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Srebf1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SREBP-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Srebf1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SREBP-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SREBP-1 nelle cellule tumorali con espressione di Srebf1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.